交叉引物恒温扩增技术快速检测结核分枝杆菌复合群和非结核分枝杆菌系统的建立

doi:10.19982/j.issn.1000-6621.20230088

中国防痨杂志 ›› 2023, Vol. 45 ›› Issue (8): 734-743.doi: 10.19982/j.issn.1000-6621.20230088

交叉引物恒温扩增技术快速检测结核分枝杆菌复合群和非结核分枝杆菌系统的建立

黄文滨¹^,², 陈丽萍³, 张望⁴, 肖婷³, 张满娥², 吴定昌³()

¹福建医科大学附属龙岩第一医院检验科(在职研究生),龙岩 364000
²福建省龙岩市第二医院分子生物实验室,龙岩 364000
³福建医科大学附属龙岩第一医院检验科,龙岩 364000
⁴杭州优思达生物技术有限公司,杭州 310053

收稿日期:2023-03-23 出版日期:2023-08-10 发布日期:2023-08-09
通信作者: 吴定昌 E-mail:2658720712@qq.com
基金资助:
福建省检验医学研究会与国家(福建)基因检测技术应用示范中心联合研创课题(2023LHYC029)

Establishment of a cross primer isothermal amplification technique for rapid detection of Mycobacterium tuberculosis complex and nontuberculous mycobacteria

Huang Wenbin¹^,², Chen Liping³, Zhang Wang⁴, Xiao Ting³, Zhang Mane², Wu Dingchang³()

¹Department of Clinical Laboratory,the First Longyan Hospital Affiliated to Fujian Medical University (On-job postgraduates),Longyan 364000,China
²Department of Molecular Biology Laboratory, the Second Hospital of Longyan, Fujian Province, Longyan 364000, China
³Department of Clinical Laboratory, the First Longyan Hospital Affiliated to Fujian Medical University,Longyan 364000, China
⁴Ustar Biotechnologies(Hangzhou) Ltd., Hangzhou 310053, China

Received:2023-03-23 Online:2023-08-10 Published:2023-08-09
Contact: Wu Dingchang E-mail:2658720712@qq.com
Supported by:
Joint Research and Innovation Project of Medical Laboratory Research Association of Fujian Province and National (Fujian) Genetic Testing Technology Application Demonstration Center(2023LHYC029)

摘要/Abstract

摘要：

目的: 建立一种快速检测结核分枝杆菌复合群(MTBC)和非结核分枝杆菌(NTM)的分子交叉引物恒温扩增技术(CPA)检测系统。方法: 针对分枝杆菌高度保守的16S rRNA基因序列设计6套CPA引物和3个探针。以含16S rRNA基因序列质粒(浓度为1000 拷贝/μl)为阳性模板,筛选确立最佳引物探针组合,并对建立的最佳反应体系进行敏感度、特异度和包容性分析。收集福建省龙岩市第二医院2022年2月8日至2023年3月14日具有肺结核症状或体征的125例疑似肺结核患者的标本,采用分枝杆菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)和建立的CPA法对收集到的标本进行检测,并对两种方法间的检测结果一致性进行统计分析,采用Kappa值评估。Kappa值≥0.75,说明一致性好。结果: 筛选出MTBC/NTM-16S-6引物和MTBC/NTM-16S-LR-FAM-3为分枝杆菌检测系统最佳引物探针组合,检测体系最低检测限为100 拷贝/μl,检测时间为40min,能检出MTBC和临床常见NTM,且与常见呼吸道细菌无交叉反应。与实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测方法相比,阳性预测值为95.65%(66/69),阴性预测值为85.71%(48/56),符合率为91.20%(114/125),Kappa值为0.82。结论: 成功建立了一种基于CPA技术的快速检测MTBC和NTM的检测系统,能够为基层医院结核病疫情防控提供一种新的检测方法。

关键词: 核酸扩增技术, 分枝杆菌,结核, 分枝杆菌,非典型

Abstract:

Objective: To establish a molecular cross primer isothermal amplification (CPA) detection system for rapid detection of Mycobacterium tuberculosis complex (MTBC) and nontuberculous mycobacteria (NTM). Methods: Six sets of CPA primers and three probes were designed for 16S rRNA-a highly conservative gene sequence of mycobacterium. Using a plasmid containing 16S rRNA gene sequence (with a concentration of 1000 copies/μl) as a positive template, the optimal primer probe combination was selected, and the sensitivity, specificity, and inclusiveness of the established optimal reaction system were analyzed. Samples of 125 presumptive tuberculosis patients with signs or symptoms of tuberculosis from the Second Hospital of Longyan, Fujian Province from February 8, 2022 to March 14, 2023, were collected and then detected by the mycobacterium nucleic acid detection kit (PCR-fluorescence probe method) and the established CPA method. The consistency of the test results between the two methods was statistically analyzed, setting Kappa value ≥0.75 as having good consistency. Results: MTBC/NTM-16S-6 primer and MTBC/NTM-16S-LR-FAM-3 were selected as the best primer probe combinations for the mycobacterium detection system. The minimum detection limit of the detection system was 100 copies/μl, and the detection time was 40 minutes. It could detect MTBC and clinically common NTM, and show no cross reaction with other common respiratory tract bacteria. Compared with the real-time fluorescence quantitative PCR (RT-PCR) detection method, the positive prediction value of the established CPA system was 95.65% (66/69), the negative prediction value was 85.71% (48/56), the total consistency rate was 91.20% (114/125), and the Kappa value was 0.82. Conclusion: A rapid detection system of MTBC and NTM based on CPA technology was successfully established, which could provide a new detection method for the prevention and control of tuberculosis epidemic in primary hospitals.

Key words: Nucleic acid amplification techniques, Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium, atypical

中图分类号:

R378.91

黄文滨, 陈丽萍, 张望, 肖婷, 张满娥, 吴定昌. 交叉引物恒温扩增技术快速检测结核分枝杆菌复合群和非结核分枝杆菌系统的建立[J]. 中国防痨杂志, 2023, 45(8): 734-743. doi: 10.19982/j.issn.1000-6621.20230088

Huang Wenbin, Chen Liping, Zhang Wang, Xiao Ting, Zhang Mane, Wu Dingchang. Establishment of a cross primer isothermal amplification technique for rapid detection of Mycobacterium tuberculosis complex and nontuberculous mycobacteria[J]. Chinese Journal of Antituberculosis, 2023, 45(8): 734-743. doi: 10.19982/j.issn.1000-6621.20230088

图/表 11

表1

表2

表3

图1

图2

表4

图3

图4

表5

表6

表7

参考文献 21

[1]	World Health Organization. Global tuberculosis report 2022. Geneva: World Health Organization, 2022.
[2]	全国第五次结核病流行病学抽样调查技术指导组, 全国第五次结核病流行病学抽样调查办公室. 2010年全国第五次结核病流行病学抽样调查报告. 中国防痨杂志, 2012, 34(8):485-508.
[3]	中华医学会结核病学分会. 非结核分枝杆菌病诊断与治疗指南(2020年版). 中华结核和呼吸杂志, 2020, 43(11):918-946. doi:10.3760/cma.j.cn112147-20200508-00570. doi: 10.3760/cma.j.cn112147-20200508-00570
[4]	中国医疗保健国际交流促进会临床微生物与感染分会, 中华医学会检验医学分会临床微生物学组, 中华医学会微生物学和免疫学分会临床微生物学组. 综合医院结核分枝杆菌感染实验室检查共识. 中华检验医学杂志, 2022, 45(4):343-353. doi:10.3760/cma.j.cn114452-20211118-00722. doi: 10.3760/cma.j.cn114452-20211118-00722
[5]	梁晨, 唐神结. 临床结核病病原体分子生物学诊断年度进展2022. 中华结核和呼吸杂志, 2023, 46(2):176-182. doi:10.3760/cma.j.cn112147-20221030-00857. doi: 10.3760/cma.j.cn112147-20221030-00857
[6]	MacLean E, Kohli M, Weber SF, et al. Advances in Molecular Diagnosis of Tuberculosis. J Clin Microbiol, 2020, 58(10). doi:10.1128/JCM.01582-19. doi: 10.1128/JCM.01582-19
[7]	尤其敏, 胡林, 彭山铭, 等. 结核分枝杆菌复合群核酸检测方法及试剂盒. CN105483219A.2019-01-15.
[8]	Zhang Z, Du J, Liu T, et al. EasyNAT MTC assay: A simple, rapid, and low-cost cross-priming amplification method for the detection of Mycobacterium tuberculosis suitable for point-of-care testing. Emerg Microbes Infect, 2021, 10(1):1530-1535. doi:10.1080/22221751.2021.1959271. doi: 10.1080/22221751.2021.1959271 URL
[9]	Ji LC, Chen S, Piao W, et al. Increasing Trends and Species Diversity of Nontuberculous Mycobacteria in A Coastal Migrant City-Shenzhen, China. Biomed Environ Sci, 2022, 35(2):146-150. doi:10.3967/bes2022.020. doi: 10.3967/bes2022.020 pmid: 35197180
[10]	张晶, 吴新伟, 陈惠玲, 等. 交叉引物恒温扩增技术检测创伤弧菌的应用研究. 中国人兽共患病学报, 2019, 35(8):711-714. doi:10.3969/j.issn.1002-2694.2019.00.132. doi: 10.3969/j.issn.1002-2694.2019.00.132
[11]	吴晓芳, 纪蕾, 严伟, 等. 交叉引物恒温扩增技术在副溶血性弧菌毒力基因检测中的应用. 中华实验和临床病毒学杂志, 2018, 32(1):85-88. doi:10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2018.01.018. doi: 10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2018.01.018
[12]	蒋淑萍, 刘昌伟, 李斌, 等. 交叉引物恒温扩增技术在初诊疑似肺结核患者诊断中的应用价值. 中国防痨杂志, 2022, 44(8):844-848. doi:10.19982/j.issn.1000-6621.20220065. doi: 10.19982/j.issn.1000-6621.20220065
[13]	Ou X, Song Y, Zhao B, et al. A multicenter study of Cross-Priming Amplification for tuberculosis diagnosis at peripheral level in China. Tuberculosis, 2014, 94(4):428-433. doi:10.1016/j.tube.2014.04.006. doi: 10.1016/j.tube.2014.04.006 pmid: 24880705
[14]	Quan S, Jiang T, Jiao W, et al. A Novel Cross-Priming Amplification-Based Assay for Tuberculosis Diagnosis in Children Using Gastric Aspirate. Front Microbiol, 2022, 13:819654. doi:10.3389/fmicb.2022.819654. doi: 10.3389/fmicb.2022.819654
[15]	Kim J, Park BG, Lim DH, et al. Development and evaluation of a multiplex loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay for differentiation of Mycobacterium tuberculosis and non-tuberculosis mycobacterium in clinical samples. PLoS One, 2021, 16(1):e244753. doi:10.1371/journal.pone.0244753. doi: 10.1371/journal.pone.0244753
[16]	Huang JJ, Li YX, Zhao Y, et al. Prevalence of nontuberculous mycobacteria in a tertiary hospital in Beijing, China, January 2013 to December 2018. BMC Microbiol, 2020, 20(1):158. doi:10.1186/s12866-020-01840-5. doi: 10.1186/s12866-020-01840-5
[17]	Shen Y, Fang L, Xu X, et al. CapitalBio Mycobacterium real-time polymerase chain reaction detection test: Rapid diagnosis of Mycobacterium tuberculosis and nontuberculous mycobacterial infection. Int J Infect Dis, 2020, 98:1-5. doi:10.1016/j.ijid.2020.06.042. doi: 10.1016/j.ijid.2020.06.042 URL
[18]	Rajendran P, Padmapriyadarsini C, Mondal R. Nontuberculous mycobacterium: An emerging pathogen: Indian perspective. Int J Mycobacteriol, 2021, 10(3):217-227. doi:10.4103/ijmy.ijmy_141_21. doi: 10.4103/ijmy.ijmy_141_21 pmid: 34494559
[19]	Ustinova VV, Smirnova TG, Sochivko DG, et al. New assay to diagnose and differentiate between Mycobacterium tuberculosis complex and nontuberculous mycobacteria. Tuberculosis (Edinb), 2019, 114:17-23. doi:10.1016/j.tube.2018.10.004. doi: 10.1016/j.tube.2018.10.004 URL
[20]	Sarro YDS, Butzler MA, Sanogo F, et al. Development and clinical evaluation of a new multiplex PCR assay for a simultaneous diagnosis of tuberculous and nontuberculous mycobacteria. EBioMedicine, 2021, 70:103527. doi:10.1016/j.ebiom.2021.103527. doi: 10.1016/j.ebiom.2021.103527 URL
[21]	王瑞白, 许达, 赵秀芹, 等. 我国结核与非结核分枝杆菌混合感染的系统性回顾及Meta分析. 中国人兽共患病学报, 2021, 37(12):1147-1151. doi:10.3969/j.issn.1002-2694.2021.00.161. doi: 10.3969/j.issn.1002-2694.2021.00.161

组名	引物名称	引物和探针序列
MTBC/NTM-16S-1	BF-1	5'-TGCAGGGGAGACTGGAAT-3'
	BR-1	5'-GTACTCCCCAGGCGGGG-3'
	CPF-1	5'-GCGTCAGTTACTGCCCAGAGAC-TGGAATGCGCAGATATCAGG-3'
	CPR-1	5'-CTGGTAGTCCACGCCGTAAACG-GTTAGCTACGGCACGGATC-3'
	LF-1	5'-CGCCTTCGCCACCGGTGT-3'
	LR-1	5'-TGTGGGTTTCCTTCCTTG-3'
MTBC/NTM-16S-2	BF-2	5'-GGAATTCCTGGTGTAGCGG-3'
	BR-2	5'-CCAGGCGGGGTACTTAATG-3'
	CPF-2	5'-CAGCGTCAGTTACTGCCCAGAG-TGCGCAGATATCAGGAGGA-3'
	CPR-2	5'-GTAGTCCACGCCGTAAACGGT-GTTAGCTACGGCACGGATC-3'
	LF-2	5'-CGCCTTCGCCACCGGTGT-3'
	LR-2	5'-TGTGGGTTTCCTTCCTTG-3'
MTBC/NTM-16S-3	BF-3	5'-GGGAGACTGGAATTCCTGG-3'
	BR-3	5'-CCAGGCGGGGTACTTAATG-3'
	CPF-3	5'-CAGCGTCAGTTACTGCCCAGA-GCGCAGATATCAGGAGGAAC-3'
	CPR-3	5'-CTGGTAGTCCACGCCGTAAACG-GTTAGCTACGGCACGGATC-3'
	LF-3	5'-AGACCCGCCTTCGCC-3'
	LR-3	5'-GTGGGTACTAGGTGTGGGTT-3'
MTBC/NTM-16S-4	BF-4	5'-GGAATTCCTGGTGTAGCGG-3'
	BR-4	5'-CAGGCGGGGTACTTAATGC-3'
	CPF-4	5'-CAGCGTCAGTTACTGCCCAGAG-TGCGCAGATATCAGGAGGA-3'
	CPR-4	5'-CTGGTAGTCCACGCCGTAAACG-GTTAGCTACGGCACGGATC-3'
	LF-4	5'-AGACCCGCCTTCGCC-3'
	LR-4	5'-GTGGGTACTAGGTGTGGGTT-3'
MTBC/NTM-16S-5	BF-5	5'-GAGTACTGCAGGGGAGACT-3'
	BR-5	5'-GGATCCCAAGGAAGGAAACC-3'
	CPF-5	5'-GCGTCAGTTACTGCCCAGAGAC-AATGCGCAGATATCAGGAGG-3'
	CPR-5	5'-CTGAGGAGCGAAAGCGTGGG-ACACCTAGTACCCACCGTT-3'
	LF-5		5'-CCGGTGTTCCTCCTGATATC-3'
	LR-5		5'-ACCCTGGTAGTCCACGCC-3'
MTBC/NTM-16S-6	BF-6		5'-GGAATTCCTGGTGTAGCGG-3'
	BR-6		5'-CAGGCGGGGTACTTAATGC-3'
	CPF-6		5'-GCGTCAGTTACTGCCCAGAGAC-AATGCGCAGATATCAGGAGG-3'
	CPR-6		5'-CTGGTAGTCCACGCCGTAAACG-GTTAGCTACGGCACGGATC-3'
	LF-6		5'-CGCCTTCGCCACCGGTGT-3'
	LR-6		5'-GTGGGTACTAGGTGTGGGTT-3'
MTBC/NTM-16S-探针	FAM-1		5'-6-FAM-CCGAGCGATTCGCTCGG-(Int BHQ1 dT)-TGTGGGTTTCCTTCCTTG-3'
	FAM-2		5'-6-FAM-CCGAGCGATTCGCTCGG-(Int BHQ1 dT)-ACGGTGGGTACTAGGTGTGGGTTTCC-3'
	FAM-3		5'-6-FAM-CCGAGCGATTCGCTCGG-(Int BHQ1 dT)-GTGGGTACTAGGTGTGGGTT-3'

反应体系成分	初始浓度	终浓度	加样量(μl/人份)
BF引物	100μmol/L	0.1μmol/L	0.02
BR引物	100μmol/L	0.1μmol/L	0.02
CPF引物	100μmol/L	0.9μmol/L	0.18
CPR引物	100μmol/L	0.9μmol/L	0.18
LF引物	100μmol/L	0.7μmol/L	0.14
LR引物	100μmol/L	0.1μmol/L	0.02
BstDNA聚合酶	8U/μl	0.32U/μl	1.00
2×预混缓冲液^a	-	-	12.50
SYTO9	-	-	0.40
质粒模板	-	-	5.00
双蒸水	-	-	5.54
总体积	-	-	25.00

反应体系成分	初始浓度	终浓度	加样量(μl/人份)
BF引物	100μmol/L	0.1μmol/L	0.02
BR引物	100μmol/L	0.1μmol/L	0.02
CPF引物	100μmol/L	0.9μmol/L	0.18
CPR引物	100μmol/L	0.9μmol/L	0.18
LF引物	100μmol/L	0.7μmol/L	0.14
不同探针	100μmol/L	0.1μmol/L	0.02
BstDNA聚合酶	8U/μl	0.32U/μl	1.00
2×预混缓冲液^a	-	-	12.50
质粒模板	-	-	5.00
双蒸水	-	-	5.94
总体积	-	-	25.00

引物名称	引物探针序列
MTBC/NTM-16S-BF-6	5'-GGAATTCCTGGTGTAGCGG-3'
MTBC/NTM-16S-BR-6	5'-CAGGCGGGGTACTTAATGC-3'
MTBC/NTM-16S-CPF-6	5'-GCGTCAGTTACTGCCCAGAGAC-AATGCGCAGATATCAGGAGG-3'
MTBC/NTM-16S-CPR-6	5'-CTGGTAGTCCACGCCGTAAACG-GTTAGCTACGGCACGGATC-3'
MTBC/NTM-16S-LF-6	5'-CGCCTTCGCCACCGGTGT-3'
MTBC/NTM-16S-LR-FAM-3	5'-6-FAM-CCGAGCGATTCGCTCGG-(Int BHQ1 dT)-GTGGG TACTAGGTGTGGGTT-3'

16S rRNA质粒浓度	平均Ct值	检测结果	16S rRNA质粒浓度	平均Ct值	检测结果
1×10⁷拷贝/μl	5.40	阳性	500拷贝/μl	9.85	阳性
1×10⁶拷贝/μl	6.27	阳性	200拷贝/μl	10.87	阳性
1×10⁵拷贝/μl	7.17	阳性	100拷贝/μl	12.27	阳性
1×10⁴拷贝/μl	8.13	阳性	50拷贝/μl	>40	阴性
1×10³拷贝/μl	9.45	阳性	双蒸水	>40	阴性

交叉引物恒温扩增技术快速检测结核分枝杆菌复合群和非结核分枝杆菌系统的建立

Establishment of a cross primer isothermal amplification technique for rapid detection of Mycobacterium tuberculosis complex and nontuberculous mycobacteria

RichHTML

PDF (PC)

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

图/表 11

参考文献 21

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价

友情链接

交叉引物恒温扩增法	RT-PCR法(份)		阳性预测值 (%)	阴性预测值 (%)	符合率 (%)	Kappa值
交叉引物恒温扩增法	阳性	阴性	阳性预测值 (%)	阴性预测值 (%)	符合率 (%)	Kappa值
阳性	66	8	95.65	85.71	91.20	0.82
阴性	3	48
合计	69	56

样本盲编序号	交叉引物恒温扩增法	RT-PCR法 (博奥生物)	RT-PCR法 (达安基因)	DNA微阵列芯片法 (博奥生物)
26	N	MTBC	MTBC	MTBC
28	N	MTBC	MTBC	MTBC
31	N	MTBC	MTBC	MTBC
5	P	N	MTBC	MTBC
25	P	N	MTBC	MTBC
36	P	N	MTBC	MTBC
56	P	N	MTBC	MTBC
64	P	N	N	N
68	P	N	N	N
95	P	N	N	N
124	P	N	N	龟或脓肿分枝杆菌

[1]	赵国连, 雷倩, 王佩, 任云霞, 关靖. DNA实时荧光恒温扩增法联合检测对结核性胸膜炎的早期诊断价值[J]. 中国防痨杂志, 2023, 45(7): 681-686.
[2]	邹远妩, 李静, 王彪, 王卓, 屈少毅, 袁志敏, 仵倩红. 结核分枝杆菌RNA恒温扩增实时荧光检测技术检测肺泡灌洗液诊断肺结核的价值[J]. 中国防痨杂志, 2023, 45(4): 434-436.
[3]	詹建, 游国庆, 何霞, 孔珏颖, 刘文果, 冯鑫, 胡彦. 两种结核分枝杆菌氟喹诺酮类药物耐药性检测方法比较及不一致原因初探[J]. 中国防痨杂志, 2023, 45(11): 1058-1063.
[4]	徐银娟, 赵国连, 崔晓利, 党丽云, 康磊, 周永. 实时荧光RNA恒温检测在气管支气管结核疗效监测中的应用价值[J]. 中国防痨杂志, 2023, 45(1): 79-84.
[5]	张芸, 李琨, 梁清涛, 刘子臣, 段鸿飞, 李雪莲, 郭茹, 车南颖, 杨新婷. 胸腔积液游离核酸检测在结核性胸膜炎早期诊断中的价值[J]. 中国防痨杂志, 2022, 44(8): 835-843.
[6]	蒋淑萍, 刘昌伟, 李斌, 徐小琴, 罗文基, 余柏林, 张月. 交叉引物恒温扩增技术在初诊疑似肺结核患者诊断中的应用价值[J]. 中国防痨杂志, 2022, 44(8): 844-848.
[7]	孙晴, 廖鑫磊, 王晨倩, 姜广路, 董玲玲, 王芬, 赵立平, 黄海荣, 王桂荣. GeneXpert MTB/RIF阳性RNA聚合酶β亚基基因突变的结核病患者中利福平耐药决定区突变特征研究[J]. 中国防痨杂志, 2022, 44(4): 349-353.
[8]	李静, 吴哲渊, 杨景卉, 杨丽媛, 王莉莉, 袁锋, 沈鑫, 江渊. 恒温扩增荧光检测法检测结核分枝杆菌复合群的应用价值[J]. 中国防痨杂志, 2022, 44(11): 1167-1173.
[9]	夏辉, 赵雁林. 世界卫生组织《关于更新使用结核分枝杆菌及其耐药性核酸扩增检测技术的建议》的启示[J]. 中国防痨杂志, 2021, 43(8): 761-765.
[10]	刘静, 肖慧霞, 田晓梅, 王福锐, 田旭升, 王晓平, 陈敏, 雷娟, 王晓林. GeneXpert MTB/RIF技术对宁夏地区快速发现肺结核及利福平耐药患者的应用效果评价[J]. 中国防痨杂志, 2021, 43(8): 783-789.
[11]	柳正卫, 彭颖, 张明五, 张钰, 陈松华, 陈彬, 王晓萌. 浙江省推广基于GeneXpert MTB/RIF检测的结核病诊断流程的效果分析[J]. 中国防痨杂志, 2021, 43(8): 790-795.
[12]	王泉, 马瑞瑛, 杨婷, 张亚丽, 许苗, 撒玉玲, 陈清波. 恒温微流控系统检测及鉴定结核分枝杆菌复合群与非结核分枝杆菌的应用价值[J]. 中国防痨杂志, 2021, 43(8): 817-820.
[13]	杨晓丽, 何兵, 王皎磊, 张云云, 张春霞, 李月, 李建军, 史文韬. GeneXpert MTB/RIF检测技术在煤工尘肺并发肺结核患者中的诊断价值[J]. 中国防痨杂志, 2021, 43(8): 821-825.
[14]	王亚翠, 孙琳, 申阿东. Xpert MTB/RIF Ultra在儿童结核病诊断中的应用进展[J]. 中国防痨杂志, 2021, 43(8): 843-846.
[15]	阮云洲, 苏伟, 姜佳雯, 李仁忠. 经济欠发达地区应用GeneXpert MTB/RIF检测发现肺结核及利福平耐药的效果分析[J]. 中国防痨杂志, 2021, 43(12): 1275-1279.