Rv2653c在大肠埃希菌中的克隆与表达研究

中国防痨杂志 ›› 2010, Vol. 32 ›› Issue (11): 752-755.

Rv2653c在大肠埃希菌中的克隆与表达研究

李邦印, 孙卫国, 程小星, 孙昌文, 熊志红, 王仲元, 王金河, 苏锐

解放军第309医院结核病研究室;

出版日期:2010-11-15 发布日期:2011-08-23
基金资助:
国家传染病重大专项(2008ZX-10003-012)

Clonging and expression of rv2653c gene of M.tuberculosis in E. coli

Li Bangyin; Sun Weiguo; Cheng Xiaoxing; Sun Changwen; Xiong Zhihong; Wang Zhongyuan; Wang Jinhe; Su Rui

The 309 Hospital; PLA; Beijing 100091; China;

Online:2010-11-15 Published:2011-08-23

摘要/Abstract

摘要： 目的从H37Rv标准株克隆出结核菌Rv2653c基因并进行表达与初步分析。方法根据H37Rv基因组序列合成引物,以PCR方法钓取Rv2653c基因,克隆到pGEM-T上,挑取阳性克隆进行测序,将正确编码基因克隆到pET24b载体上,在BL21大肠埃希菌菌株中以IPTG诱导表达重组蛋白。以金属螯合层析初步分离纯化重组蛋白,采用western blot方法对重组抗原进行抗原性初步分析。结果首先获得了重组的Rv2653c编码的蛋白,表达产率不低于20%,初步纯化纯度约90%,以人血清进行的western blot分析发现,Rv2653c重组蛋白有较好的抗原性。结论获得了Rv2653c重组蛋白为进一步寻探讨其功能及应用价值奠定基础。

关键词: 分枝杆菌, 结核, 大肠埃希菌, 细菌蛋白质类, 重组蛋白质类

Abstract: Objective To study the expression and purification of Rv2653c protein of Mycobacterium tuberculosis expressed in E.coli.Methods Rv2653c genes were amplified by polymerase chain reaction from genome of Mycobacterium tuberculosis H37Rv,and first cloned into vector pGEMT.After the sequence was confirmed,the gene was subcloned into vector pET24b.Recombinant Rv2653c protein was obtained by expression and purification.The antigenicity of the fused protein was analyzed by Western-blot.Results The DNA sequences of ...

Key words: Mycobacterium tuberculosis, Escherichia coli, bacterial proteins, recombinant proteins

中图分类号:

R378

李邦印, 孙卫国, 程小星, 孙昌文, 熊志红, 王仲元, 王金河, 苏锐. Rv2653c在大肠埃希菌中的克隆与表达研究[J]. 中国防痨杂志, 2010, 32(11): 752-755.

LI Bang-Yin, SUN Wei-Guo, CHENG Xiao-Xing, SUN Chang-Wen, XIONG Zhi-Hong, WANG Zhong-Yuan, WANG Jin-He, SU Rui. Clonging and expression of rv2653c gene of M.tuberculosis in E. coli[J]. Chinese Journal of Antituberculosis, 2010, 32(11): 752-755.

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