结核分枝杆菌Rv2352c基因的克隆表达及其抗原活性鉴定

中国防痨杂志 ›› 2010, Vol. 32 ›› Issue (10): 25-30.

结核分枝杆菌Rv2352c基因的克隆表达及其抗原活性鉴定

曹廷明; 贾红彦; 古淑香; 郑晓静; 李自慧; 杜凤娇; 刘洋; 刘忠泉; 邢爱英; 杜博平; 马玙; 张宗德;

北京市结核病胸部肿瘤研究所;

出版日期:2010-10-15 发布日期:2011-08-25
基金资助:
结核病诊断分子标识研究(2008ZX10003-005); 结核病防治关键技术研究(D08050700640805)

Prokaryotic expression,purification and antigenicity identification of Mycobacterium tuberculosis rv2352c gene

Cao Tingming; Jia Hongyan; Gu Shuxiang; Zhen Xiaojing; Li Zihui; Du Fengjiao; Liu Yang; Liu Zhongquan; Xing Aiying; Du Boping; Ma Yu; Zhang Zongde

Beijing Tuberculosis and Thoracic Tumor Research Institute; Beijing 101149; China;

Online:2010-10-15 Published:2011-08-25

摘要/Abstract

摘要： 目的构建含结核分枝杆菌(M.tb)rv2352c基因原核表达载体,经转化E.coli以表达Rv2352c融合蛋白,并研究其抗原性。方法用PCR扩增M.tb rv2352c基因,克隆入pET30a(+)质粒,构建pET30a(+):rv2352c重组质粒,阳性克隆测序验证正确后转化入表达宿主大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导Rv2352c蛋白表达。经Ni+-NTA层析柱纯化融合蛋白,通过SDS-PAGE和结核患者血清Western blot进行鉴定。将纯化的重组蛋白分别免疫家兔,制备抗Rv2352c抗血清,抗血清的效价测定采用酶联免疫吸附试验法(ELISA),取兔抗血清与纯化蛋白Rv2352c通过Western blot方法,检测抗体特异性。结果经酶切鉴定和测序分析证实rv2352c原核表达质粒构建正确,SDS-PAGE和Western blot结果显示,在45 kD处呈现单一蛋白条带。用重组蛋白Rv2352c免疫接种后可诱导出高滴度的特异性抗体。纯化蛋白通过Western blot鉴定证实为目的蛋白,有较强的免疫原性。结论成功构建原核表达重组质粒pET30a(+):rv2352c,制备和纯化的Rv23...

关键词: 分枝杆菌, 结核, 细菌蛋白质类, 抗原, 细菌, 重组融合蛋白质类

Abstract: Objective To express,purify Mycobacterium tuberculosis(M.tb) Rv2352c protein in E.coli and study its antigenicity.Methods The M.tb rv2352c gene was amplified by PCR and then cloned into the expression plasmid pET30a(+).The positive clones were analyzed and transformed into E.coli BL21(DE3).The bacteria expressing Rv2352c were cultured in different concentration of IPTG.The fusion protein was purified by Ni+-NTA column,detected by SDS-PAGE,and reacted with the sera from tuberculosis patients by Western blot....

Key words: Mycobacterium tuberculosis, bacterial proteins, antigens, bacterial, recombinant fusion proteins

中图分类号:

R378

曹廷明, 贾红彦, 古淑香, 郑晓静, 李自慧, 杜凤娇, 刘洋, 刘忠泉, 邢爱英, 杜博平, 马玙, 张宗德. 结核分枝杆菌Rv2352c基因的克隆表达及其抗原活性鉴定[J]. 中国防痨杂志, 2010, 32(10): 25-30.

CAO Ting-Ming, JIA Hong-Yan, GU Shu-Xiang, ZHENG Xiao-Jing, LI Zi-Hui, DU Feng-Jiao, LIU Yang, LIU Zhong-Quan, XING Ai-Ying, DU Bo-Ping, MA Yu, ZHANG Zong-De. Prokaryotic expression,purification and antigenicity identification of Mycobacterium tuberculosis rv2352c gene[J]. Chinese Journal of Antituberculosis, 2010, 32(10): 25-30.

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