噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌阿米卡星耐药性方法的建立及应用评价

中国防痨杂志 ›› 2011, Vol. 33 ›› Issue (3): 158-162.

噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌阿米卡星耐药性方法的建立及应用评价

李同心² 崔振玲¹ 汪小黎¹ 陆俊梅¹ 王洁¹ 胡忠义¹

1.同济大学附属上海市肺科医院/上海市结核重点实验室, 上海, 200433; 2.重庆市公共卫生医疗救治中心, 重庆, 400036

收稿日期:2011-11-16 出版日期:2011-03-20 发布日期:2012-03-16
通信作者: 崔振玲 E-mail:cuizhenling@163.com
基金资助:
国家十一五科技重大专项课题(2008ZX10003-003-02); 上海市科委课题（09415801800）

Evaluation of phage amplified biologically assay for amikacin susceptibility test of Mycobacterium tuberculosis

Li Tongxin², Cui Zhenling¹, Wang Xiaoli¹, Lu Junmei¹, Wang Jie¹, Hu Zhongyi¹

1.Shanghai Tuberculosis Key Laboratory; The Pulmonary Hospital of Shanghai Affiliated Tongji University, Shanghai 200433, China; 2.Chongqing Infectious Diseases Medical Center,Chongqing,400036

Received:2011-11-16 Online:2011-03-20 Published:2012-03-16
Contact: Cui Zhenling E-mail:cuizhenling@163.com

摘要/Abstract

摘要： 目的建立结核分枝杆菌阿米卡星(Am)耐药性的噬菌体生物扩增法(PhaB)快速检测技术，并探讨其临床应用价值。方法通过不同菌量及药物浓度的筛选，建立PhaB测定结核分枝杆菌阿米卡星药敏检测方法；用该方法对108株结核分枝杆菌临床分离株进行了阿米卡星药敏检测，同步进行Bactec MGIT 960的Am药敏检测，对2种方法的检测结果进行比较分析。结果不符合的菌株测定其Am的最低抑茵浓度(MIC)。结果以细菌接种量10^-3 mg／ml、药物浓度2 μg／ml、37℃作用48-h为药敏最佳检测条件，噬菌体检测108株结核分枝杆菌临床分离株阿米卡星敏感82株、耐药26株，Bactec MGIT 960检测敏感80株、耐药28株；2法测定均为敏感79株、均为耐药25株。以Bactec MGIT 960测定结果为判断标准，则PhaB的敏感性、特异性、阳性和阴性预测值及符合率分别为89.3%、98.8%、96.2%、96.3%、96.3%。结论 PhaB检测结核分枝杆菌的Am耐药性有较高的敏感性、特异性和准确性，整个检测只需3 d，且操作简单、不需特殊仪器设备，可作为 M .TB临床分离株Am药敏快速检测备选方法之一。

关键词: 分枝杆菌, 结核, 阿米卡星, 药物敏感性实验, 细菌噬菌体

Abstract: Objective To set up a rapid detective technique for amikacin (Am) resistance inMycobacterium tuberculosis( M .TB) by phage amplified biologically (PhaB) assay, and to evaluate its value for application in clinical isolates.  Methods The different concentrations of M .TB and Am were screened to obtain the best conditions in PhaB assay. Am susceptibility of 108 M .TB clinical isolates were detected by PhaB assay and compared with the Results from Bactec MGIT 960. If the Results of two Methods were different, the MICs of strains were detected. Results The best test conditions of PhaB assay were that 10^-3mg/ml of M .TB and 2 μg/ml of amikacin were mixed and incubated at 37 ℃ for 48 hours．Of 108 M .TB clinical isolates, 82 were sensitive and 26 were resistant to Am by PhaB assay; while 80 were sensitive and 28 were resistant to Am by Bactec MGIT 960. When Bactec MGIT 960 was used as the control，the sensitivity，specificity, PPV, NPV and accuracy of PhaB assay were 89.3%, 98.8%, 96.2%, 96.3%, 96.3%, respectively. Conclusions The PhaB assay only need 3 days. It is a highly sensitive, specific, accurate, simple and low-cost method for the rapid Am susceptibility test of M .TB isolates.

Key words: Mycobacterium tuberculosis, amikacin, microbial sensiti dity test, bacteriophages

李同心崔振玲汪小黎陆俊梅王洁胡忠义. 噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌阿米卡星耐药性方法的建立及应用评价[J]. 中国防痨杂志, 2011, 33(3): 158-162.

Li Tongxin, Cui Zhenling, Wang Xiaoli,Lu Junmei, Wang Jie, Hu Zhongyi. Evaluation of phage amplified biologically assay for amikacin susceptibility test of Mycobacterium tuberculosis[J]. Chinese Journal of Antituberculosis, 2011, 33(3): 158-162.

参考文献

［1］中华人民共和国卫生部.全国结核病耐药性基线调查报告(2007—2008年)［M］.北京:人民卫生出版社,2010：3.
［2］ World Health Organization. The Global MDR-TB&XDR-TB Response Plan (2007—2008) ［M］. Geneva: WHO,2007: 18.
［3］何国钧,肖和平.抗结核药物的研究进展［J］.中华结核和呼吸杂志,2000,23(10):621-625.
［4］唐神结,肖和平.严重耐药结核病的研究进展［J］.中华结核和呼吸杂志,2009,32(5):380-383.
［5］ Wilson SM, al-Suwaidi Z, McNerney R, Porter J, Drobniewski F. Evaluation of a new rapid bacteriophage-based method for the drug susceptibility testing ofMycobacterium tuberculosis ［J］. Nat Med, 1997, 3(4):465-468.
［6］胡忠义,倪莲娣,靳安佳,董惠贤,钟敏,李建农,翁心华.噬菌体生物扩增法快速检测结核分枝杆菌方法学研究［J］.中华结核和呼吸杂志,2004,27(12):801-805.
［7］崔振玲,胡忠义,王洁,张莹蓉,陈慧萍,张文宏,翁心华.结核分枝杆菌异烟肼耐药性的噬菌体测定技术研究［J］.中华传染病杂志,2005,23(4):225-228.
［8］王洁,崔振玲,胡忠义,张滢蓉,乐军,张文宏,翁心华.噬菌体法同时检测四种一线抗结核药物耐药性［J］.中华传染病杂志,2006,24(2):102-105.
［9］ Rüsch-Gerdes S, Pfyffer GE, Casal M, Chadwick M, Siddiqi S. Multicenter laboratory validation of the BACTEC MGIT 960 technique for testing susceptibilities ofMycobacterium tuberculosisto classical second-line drugs and newer antimicrobials［J］. J Clin Microbiol,2006,44(3):688-692.
［10］Salfinger M, Heifets LB. Determination of pyrazinamide MICs forMycobacterium tuberculosisat different pHs by the radiometric method［J］. Antimicrob Agents Chemother, 1988, 32(7): 1002-1004.
［11］ Aono A, Hirano K, Hamasaki S, Abe C. Evaluation of BACTEC MGIT 960 PZA medium for susceptibility testing ofMycobacterium tuberculosisto pyrazinamide (PZA):compared with the results of pyrazinamidase assay and Kyokuto PZA test［J］.Diagn Microbiol Infect Dis,2002,44(4):347-352.
［12］胡忠义.结核分枝杆菌耐药性快速测定方法及其评价［J］.中华结核和呼吸杂志,2003, 26(7):107-109.
［13］ Mizuguchi Y, Suga K, Masuda K, Yamada T. Genetic and biochemical studies on drug-resistant mutants inMycobacterium smegmatis ［J］. Jpn J Microbiol,1974,18(6): 457-462.
［14］ Maus CE, Plikaytis BB, Shinnick TM. Molecular analysis of cross-resistance to capreomycin, kanamycin, amikacin, and viomycin inMycobacterium tuberculosis ［J］. Antimicrob Agents Chemother, 2005, 49(8):3192-3197.
［15］付佑辉,郑瑞娟,王洁,金文国,胡忠义.显微镜观察药物敏感度检测技术在二线抗结核药耐药性检测中应用［J］.中华检验医学杂志,2010,33(1):25-29.
［16］林健雄,王冬敏,彭东东,陈秉熙,陈潮钦,蔡杰.噬菌体生物扩增法快速测定结核分枝杆菌卷曲霉素耐药性的研究［J］.中国防痨杂志, 2008, 30(6): 506-509.
［17］边泽源,何川,涂少华,涂荣跃.噬菌体法直接检测痰标本中结核分枝杆菌利福平耐药性的研究［J］.实验与检验医学,2009,27(6): 145-146.

[1]	刘晓莉, 雷丽梅, 郭周莉, 黄殷, 徐静, 赵霞, 王燕, 付莉. 结核病患者产生病耻感与领悟社会支持的相关性研究[J]. 中国防痨杂志, 2020, 42(9): 1002-1008.
[2]	中国防痨协会学术工作委员会《中国防痨杂志》编辑委员会. 抗结核药品固定剂量复合制剂的临床使用专家共识[J]. 中国防痨杂志, 2020, 42(9): 885-893.
[3]	靳鸿建. 我国县级结核病防治服务体系建设及防治工作亟需加强——一位老防痨工作者的意见和建议[J]. 中国防痨杂志, 2020, 42(9): 896-902.
[4]	张灿有, 夏辉, 成君. Ⅱ级生物安全柜在结核病实验室中的检测及报告要求[J]. 中国防痨杂志, 2020, 42(9): 903-909.
[5]	周林, 刘二勇, 孟庆琳, 陈明亭, 周新华, 高微微, 林明贵, 谢汝明. 《WS 288—2017 肺结核诊断》标准实施后肺结核诊断质量评估分析[J]. 中国防痨杂志, 2020, 42(9): 910-915.
[6]	刘二勇, 王前, 周林, 张国钦, 张修磊, 马永成, 杨枢敏, 王毳, 孟庆琳, 陈明亭, 林明贵, 屠德华. 我国部分地区病原学检测阴性肺结核诊断质量现状分析[J]. 中国防痨杂志, 2020, 42(9): 916-920.
[7]	孟庆琳, 李进岚, 林定文, 马永成, 侯双翼, 刘年强, 周林. 结核病防治从业人员对新的结核病标准相关知识知晓情况调查分析[J]. 中国防痨杂志, 2020, 42(9): 921-925.
[8]	王前, 周林, 刘二勇, 赵雁林, 李涛, 陈明亭, 杨丽佳, 王嘉. 我国县级结核病定点医疗机构结核病诊断能力现况调查研究[J]. 中国防痨杂志, 2020, 42(9): 926-930.
[9]	李婷, 何金戈, 苏茜, 李京, 李运葵, 高文凤, 高媛, 杨文. 结核菌素试验在四川省布拖县HIV感染/AIDS患者中筛查结核感染的价值[J]. 中国防痨杂志, 2020, 42(9): 931-936.
[10]	李运葵, 何金戈, 苏茜, 李婷, 李京, 高文凤, 杨文, 毛光玉. 结核病症状筛查在四川省布拖县HIV感染/AIDS患者中发现结核病患者的价值[J]. 中国防痨杂志, 2020, 42(9): 937-941.
[11]	苏茜, 夏勇, 逯嘉, 王丹霞, 何金戈. 2009—2018年四川省0~14 岁儿童肺结核流行特征分析[J]. 中国防痨杂志, 2020, 42(9): 942-947.
[12]	邓亚丽, 张天华, 刘卫平, 张宏伟, 马煜, 李鹏. 2014—2018年陕西省肺结核发病的时空聚集性分析[J]. 中国防痨杂志, 2020, 42(9): 948-955.
[13]	董晓, 赵珍, 刘年强, 王森路, 崔燕. 2009—2017年新疆维吾尔自治区老年肺结核发现特征分析[J]. 中国防痨杂志, 2020, 42(9): 956-961.
[14]	梁瑞云, 方伟军, 任会丽, 黎惠如, 张晖. 非结核分枝杆菌肺病并发与未并发糖尿病患者的CT征象研究[J]. 中国防痨杂志, 2020, 42(9): 962-967.
[15]	马廷龙, 韩毅, 程序, 刘志东. 超声抗结核药品电导入联合化疗对胸壁结核的疗效观察[J]. 中国防痨杂志, 2020, 42(9): 968-972.