脂阿拉伯甘露聚糖的提纯及其对肺结核的诊断价值

中国防痨杂志 ›› 2011, Vol. 33 ›› Issue (3): 149-152.

脂阿拉伯甘露聚糖的提纯及其对肺结核的诊断价值

彭荣乐军金瑞良景玲杰韩敏

同济大学附属上海市肺科医院/上海市结核(肺)重点实验室,上海,200433

收稿日期:2010-08-15 出版日期:2011-03-20 发布日期:2012-03-16
通信作者: 乐军 E-mail:yuejunnan@yahoo.com.cn
基金资助:
1.国家“十一五”科技重大专项（2008ZX10003003）；2.上海市卫生局青年基金（2008Y26）

Extraction of lipoarabinomanan and its diagnosis value for pulmonary tuberculosis

Peng Rong,Yue Jun,Jin Ruiliang,Jing Lingjie,Han Min

Clinical Laboratory of Shanghai Pulmonary Hospital Affiliated to Tongji University/Shanghai Key Laboratory of Tuberculosis, Shanghai 200433

Received:2010-08-15 Online:2011-03-20 Published:2012-03-16
Contact: Yue Jun E-mail:yuejunnan@yahoo.com.cn

摘要/Abstract

摘要： 目的初步建立提取纯化结核分枝杆菌（M .TB）脂阿拉伯甘露聚糖（lipoarabinomanan,LAM）的方法，并将其用于血清标本检测，评价其对肺结核的诊断价值。方法 M .TB菌体经冰浴超声破碎，乙醇回流，DNase I 酶RNase酶除去DNA和RNA, 热酚水法去蛋白，氯仿甲醇去酚和脂质，得到粗制的脂多糖。经Sephacryl-100凝胶过滤层析分离纯化,得到LAM。将其作为抗原，通过免疫金渗滤法检测涂阳肺结核和对照血清标本中的LAM抗体。结果所得LAM经SDS-PAGE银染，与对照标准品大小一致，为37 kDa。血清LAM抗体检测对肺结核诊断的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值、和涂片符合率分别为91.7%、87.8%、92.7%、86.2%、90.2%。结论成功提取到LAM抗原，用其检测血清结核抗体显示出理想的敏感性和特异性，有望成为结核病血清学快速诊断方法之一。

关键词: 结核, 肺/诊断, 分枝杆菌, 脂多糖类

Abstract: Objective To develop a method for extracting lipoarabinomanan（LAM）fromMycobacterium tuberculosis , and to evaluate serodiagnosis value of LAM for pulmonary tuberculosis. Methods Mycobacterium tuberculosiswas sonicated in ice and then refluxed with ethanol; treated with DNase I and RNase; removed proteins with phenol; removed phenol and lipide with chloroform/methanol. The crude lipopolysaccharide (LPS) was prepared. LPS was purified with Sephacryl-100 gel filtration, and LAM were obtained. LAM was used as antigen to detect anti-LAM IgG in serum by dot immunogold filtration assay.  Results The relative molecular weight of LAM was approximately 37 kDa, consistent with the reference. The sensitivity, specificity, positive predictive value, negative predictive value and coincidence with smear were 91.7%, 87.8%, 92.7%, 86.2% and 90.2%, respectively. Conclusions LAM was obtained successfully. LAM used as antigen to detect anti-TB antibody in serum showed good specificity and sensitivity, and might be one of canditate antigens for the serodiagnosis of TB serology.

Key words: Tuberculosis, pulmonary/diagnosis, Mycobacterium tuberculosis, lipopolysaccharides

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