噻吩-2-羧酸肼生化实验鉴别牛分枝杆菌的可行性分析

doi:10.19982/j.issn.1000-6621.20240543

中国防痨杂志 ›› 2025, Vol. 47 ›› Issue (7): 901-906.doi: 10.19982/j.issn.1000-6621.20240543

噻吩-2-羧酸肼生化实验鉴别牛分枝杆菌的可行性分析

杨新宇¹, 陈昊¹, 代小伟¹, 李悄², 庞梦迪², 李波³, 缪鸿豪², 李洁¹^,²(), 李传友¹^,²()

¹ 北京市疾病预防控制中心结核病实验室,北京 100013
² 首都医科大学公共卫生学院,北京 100038
³ 北京市疾病预防控制中心结核病门诊部,北京 100013

收稿日期:2024-12-03 出版日期:2025-07-10 发布日期:2025-07-03
通信作者: 李传友,Email:lichuanyou@ccmu.edu.cn; 李洁,Email:lijie304304@163.com
基金资助:
首都卫生发展科研专项(2024-2G-30114)

Feasibility analysis of identification of Mycobacterium bovis by thiophen-2-carboxylic acid hydrazine biochemical test

Yang Xinyu¹, Chen Hao¹, Dai Xiaowei¹, Li Qiao², Pang Mengdi², Li Bo³, Miao Honghao², Li Jie¹^,²(), Li Chuanyou¹^,²()

¹ Tuberculosis Laboratory, Beijing Center for Disease Prevention and Control, Beijing 100013, China
² School of Public Health, Capital Medical University, Beijing 100038, China
³ Department of Tuberculosis Outpatient, Beijing Center for Disease Prevention and Control, Beijing 100013, China

Received:2024-12-03 Online:2025-07-10 Published:2025-07-03
Contact: Li Chuanyou, Email: lichuanyou@ccmu.edu.cn; Li Jie, Email: lijie304304@163.com
Supported by:
Capital’s Funds for Health Improvement and Research(2024-2G-30114)

摘要/Abstract

摘要：

目的:评估使用噻吩-2-羧酸肼鉴别培养基作为鉴定牛分枝杆菌的可靠性。方法:使用对硝基苯甲酸和噻吩-2-羧酸肼鉴别培养基对2019年1月1日至12月31日从北京市14家结核病防治机构和6家定点医院收集到的1267株分枝杆菌临床分离株进行鉴定,并对结核分枝杆菌复合群中浓度为5μg/ml的噻吩-2-羧酸肼鉴别培养基中菌落数小于20个的菌株再次接种至含5μg/ml、2.5μg/ml、1.25μg/ml、0.63μg/ml的噻吩-2-羧酸肼罗氏培养基中进行敏感度测试,同时对菌落数小于20个的菌株进行PCR扩增,对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,根据是否产生168bp条带判断是否为牛分枝杆菌。结果:1267株分枝杆菌临床分离株中有1177株属于结核分枝杆菌复合群,其中148株菌在5μg/ml的噻吩-2-羧酸肼鉴别培养基中菌落数小于20,更换培养基后再次对148株菌进行鉴定,其中在5μg/ml的噻吩-2-羧酸肼鉴别培养基中敏感的菌株为27株,在2.5μg/ml的噻吩-2-羧酸肼鉴别培养基中敏感的菌株为10株,使用分子生物学PCR技术鉴定148株分离株,仅有1株为牛分枝杆菌。结论:使用噻吩-2-羧酸肼鉴别牛分枝杆菌误差率较高,不能作为可靠的鉴定依据。

关键词: 分枝杆菌, 牛, 生物化学, 可行性研究

Abstract:

Objective: To evaluate the reliability of using thiophene-2-carboxylic acid hydrazide medium for identifying Mycobacterium bovis. Methods: One thousand two hundred and sixty-seven clinically isolated mycobacterium strains collected from 14 tuberculosis prevention and control institutions and 6 designated hospitals in Beijing from January 1 to December 31, 2019 were identified by medium containing P-nitrobenzoic acid and thiophen-2-carboxylic acid hydrazide. The strains of Mycobacterium tuberculosis complex (MTBC) with fewer than 20 colonies growing on culture medium containing 5 μg/ml thiophene-2-carboxylic acid hydrazine were re-inoculated into roche culture medium containing 5 μg/ml, 2.5 μg/ml, 1.25 μg/ml and 0.63 μg/ml thiophene-2-carboxylic acid hydrazine from another reagent company for sensitivity testing. At the same time, these strains were amplified by PCR and the products were subjected to agarose gel electrophoresis to determine whether they were Mycobacterium bovis by the presence of 168 bp bands. Results: Of the 1267 clinical mycobacterium isolates, 1177 strains belonged to MTBC, and 148 of these strains formed fewer than 20 colonies after culture on the medium containing 5 μg/ml of thiophene-2-carboxylic acid hydrazine. After changing into using medium from another reagent company, there were 27 sensitive strains in the 5 μg/ml medium and 10 sensitive strains in a lower concentration (2.5 μg/ml) of the same medium. In addition, molecular biological PCR experiments showed that only 1 of the 148 isolates was identified as Mycobacterium bovis. Conclusion: The error rate of thiophene-2-carboxylic acid hydrazine medium for identifying Mycobacterium bovis was high, so this method could not be used as a reliable identification evidence.

Key words: Mycobacterium bovis, Biochemistry, Feasibility studies

中图分类号:

R378.91

杨新宇, 陈昊, 代小伟, 李悄, 庞梦迪, 李波, 缪鸿豪, 李洁, 李传友. 噻吩-2-羧酸肼生化实验鉴别牛分枝杆菌的可行性分析[J]. 中国防痨杂志, 2025, 47(7): 901-906. doi: 10.19982/j.issn.1000-6621.20240543

Yang Xinyu, Chen Hao, Dai Xiaowei, Li Qiao, Pang Mengdi, Li Bo, Miao Honghao, Li Jie, Li Chuanyou. Feasibility analysis of identification of Mycobacterium bovis by thiophen-2-carboxylic acid hydrazine biochemical test[J]. Chinese Journal of Antituberculosis, 2025, 47(7): 901-906. doi: 10.19982/j.issn.1000-6621.20240543

图/表 3

表1

图1

图2

参考文献 11

[1]	中国防痨协会基础专业委员会. 结核病诊断实验室检验规程. 北京: 中国教育文化出版社, 2006: 52-53.
[2]	Garnier T, Eiglmeier K, Camus JC, et al. The complete genome sequence of Mycobacterium bovis. Proc Natl Acad Sci U S A, 2003, 100(13): 7877-7882. doi:10.1073/pnas.1130426100.
[3]	梅早仙, 冀萍, 吴琦, 等. 牛结核分枝杆菌与结核分枝杆菌鉴别方法的研究现状. 中华结核和呼吸杂志, 2015, 38(5):387-389. doi:10.3760/cma.j.issn.1001-0939.2015.05.016.
[4]	赵雁林, 逄宇. 结核病实验室检验规程. 北京: 人民卫生出版社, 2015: 59-65.
[5]	杨航. 牛结核病诊断技术的建立与初步应用. 石河子: 石河子大学, 2020.
[6]	姜广路, 梁倩, 付育红, 等. 以噻吩二羧酸肼实验结果作为鉴定牛分枝杆菌依据的可靠性研究. 中华结核和呼吸杂志, 2013, 36(5): 360-362. doi:10.3760/cma.j.issn.1001-0939.2013.05.014.
[7]	Bakshi CS, Shah DH, Verma R, et al. Rapid differentiation of Mycobacterium bovis and Mycobacterium tuberculosis based on a 12.7-kb fragment by a single tube multiplex-PCR. Vet Microbiol, 2005, 109(3-4): 211-216. doi:10.1016/j.vetmic.2005.05.015. pmid: 16005166
[8]	Bakshi CS, Shah DH, Verma R, et al. Corrigendum to “Rapid differentiation of Mycobacterium bovis and Mycobacterium tuberculosis based on a 12.7-kb fragment by a single tube multiplex-PCR”. Vet Microbiol, 2007, 123(1-3): 282. doi:10.1016/j.vetmic.2007.02.005.
[9]	国家市场监督管理总局, 国家标准化管理委员会. GB/T 18645—2020动物结核病诊断技术. 2020-12-14.
[10]	徐彩红, 周向梅, 范伟兴, 等. 人畜禽共患结核病防控现状及展望. 中国防痨杂志, 2021, 43(10): 993-997. doi:10.3969/j.issn.1000-6621.2021.10.003.
[11]	宋银娟, 赵德明, 周向梅. 牛分枝杆菌引起人结核病的概况和控制. 中国防痨杂志, 2019, 41(10): 1132-1135. doi:10.3969/j.issn.1000-6621.2019.10.013.

序号	估算对照菌落生长数	TCH浓度5μg/ml		TCH浓度2.5μg/ml		TCH浓度1.25μg/ml		TCH浓度0.63μg/ml
序号	估算对照菌落生长数	菌落数	百分比(%)^a	菌落数	百分比(%)^a	菌落数	百分比(%)^a	菌落数	百分比(%)^a
1	700	6	0.86	10	1.43	500	71.43	700	100.00
2	500	0	0.00	0	0.00	40	8.00	400	80.00
3	600	1	0.17	15	2.50	600	100.00	600	100.00
4	800	0	0.00	0	0.00	0	0.00	500	62.50
5	700	1	0.14	0	0.00	200	28.57	700	100.00
6	600	2	0.33	20	3.33	600	100.00	600	100.00
7	600	0	0.00	20	3.33	600	100.00	600	100.00
8	400	0	0.00	6	1.50	300	75.00	400	100.00
9	600	0	0.00	15	2.50	600	100.00	600	100.00
10	600	0	0.00	10	1.67	600	100.00	600	100.00
11	700	1	0.14	5	0.71	700	100.00	700	100.00
12	1000	1	0.10	3	0.30	400	40.00	1000	100.00
13	500	3	0.60	10	2.00	500	100.00	500	100.00
14	900	0	0.00	0	0.00	100	11.11	300	33.33
15	500	0	0.00	2	0.40	20	4.00	500	100.00
16	500	0	0.00	0	0.00	4	0.80	500	100.00
17	600	0	0.00	0	0.00	0	0.00	700	116.67
18	500	1	0.20	20	4.00	300	60.00	500	100.00
19	1000	4	0.40	8	0.80	800	80.00	1000	100.00
20	1000	5	0.50	100	10.00	800	80.00	800	80.00
21	700	0	0.00	30	4.29	700	100.00	700	100.00
22	900	3	0.33	20	2.22	900	100.00	900	100.00
23	600	3	0.50	20	3.33	600	100.00	600	100.00
24	700	5	0.71	10	1.43	700	100.00	700	100.00
25	700	2	0.29	20	2.86	700	100.00	700	100.00
26	800	5	0.63	30	3.75	800	100.00	800	100.00
27	500	2	0.40	30	6.00	400	80.00	500	100.00

噻吩-2-羧酸肼生化实验鉴别牛分枝杆菌的可行性分析

Feasibility analysis of identification of Mycobacterium bovis by thiophen-2-carboxylic acid hydrazine biochemical test

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[1]	任斐, 马进宝, 李荣, 杨翰, 杨虹, 武延琴, 杨新军, 党丽云. 高剂量莫西沙星短程方案对利福平耐药肺结核的疗效及适用性研究[J]. 中国防痨杂志, 2023, 45(1): 52-59.
[2]	王倪, 黄飞, 竺丽梅, 曾谊, 张瑞梅, 耿红, 刘学法, 郑建刚, 宗佩兰, 曾忠, 李进岚, 蔡翠, 郭晓红, 钟引, 刘莉, 谢艳, 杜芳芳, 周林, 成诗明. 提高抗结核药品固定剂量复合剂在省市级结核病定点医院推广使用的实施性研究[J]. 中国防痨杂志, 2022, 44(9): 927-933.
[3]	金龙, 王利华, 张晓磊, 蒋怀龙, 李晓南, 刘玉琴. 改良全口服短程化疗方案治疗耐多药肺结核的有效性及安全性分析[J]. 中国防痨杂志, 2022, 44(12): 1321-1326.
[4]	陈颜强,赵立明,李薇,孟艺哲,白洪忠. 结核性脑膜炎患者行脑脊液腺苷脱氨酶及其他生化项目检测的临床意义[J]. 中国防痨杂志, 2019, 41(7): 754-758.
[5]	赵亚群，李洪敏，何秀云，吴雪琼，刘江，许脉，王永，狄淬砺，汤可. 早期行脑室腹腔分流术治疗结核性脑积水的可行性研究[J]. 中国防痨杂志, 2015, 37(2): 157-160.
[6]	陈秋兰于兰周林陈明亭常春. 对列车旅客开展结核病健康教育活动的可行性研究[J]. 中国防痨杂志, 2013, 35(1): 48-53.
[7]	宋红焕季明唐国锋朱玮朱澄玉陈诚许卫国陆伟. 液基夹层杯技术用于基层实验室结核病诊断的可行性研究[J]. 中国防痨杂志, 2012, 34(7): 441-444.
[8]	桓世彤陈嵘刘小秋欧喜超姜世闻赵雁林张治英詹思延. 电子药盒取药记录监测肺结核患者服药行为的可行性评估[J]. 中国防痨杂志, 2012, 34(7): 419-424.
[9]	徐祖辉白丽琼龚德华唐益张贻瑞. 湖南省肺结核门诊辅助诊疗单病种付费的可行性研究[J]. 中国防痨杂志, 2012, 34(12): 780-783.
[10]	成诗明,钟球,郑金凤,谢艳光,李晓凤,王伟,陈诚,徐敏,杜昕,. 固定剂量复合剂在国家结核病防治规划中的应用研究[J]. 中国防痨杂志, 2007, 29(2): 111-116.