结核分枝杆菌CFP10-ESAT6-CFP21融合蛋白克隆表达及全血IFN-γ的检测

中国防痨杂志 ›› 2010, Vol. 32 ›› Issue (04): 211-216.

结核分枝杆菌CFP10-ESAT6-CFP21融合蛋白克隆表达及全血IFN-γ的检测

周舟;丁元生;刘忠华;毛翎;桂徐蔚;胡忠义

苏州大学基础医学与生命科学学院；同济大学附属上海市肺科医院/上海市结核病(肺)重点实验室；

出版日期:2010-04-20 发布日期:2010-04-20
基金资助:
国家科技重大专项课题资助项目(2008ZX10003003-02);上海市公共卫生重点学科建设项目(08GWZX0104);上海市科科资助项目(07DZ22012,08DZ2291500,08DZ2271300)

ZHOU Zhou, DING Yuan-Sheng, LIU Zhong-Hua, MAO Ling, GUI Xu-Wei, HU Zhong-Yi

Online:2010-04-20 Published:2010-04-20

摘要/Abstract

摘要： 目的构建结核分枝杆菌CFP10-ESAT-6-CFP21(CE21)融合蛋白的重组质粒,通过IFN-γ的检测探讨CE21在结核病检测中的价值。方法通过聚合酶链式反应(PCR)扩增获得CFP21和CFP10-ESAT-6(CE)基因片段,分别连接到pMD18-T,并将两片段2次连接到表达载体pET21a(+)中,获得pET21a-CFP10-ESAT-6-CFP21重组质粒;经表达纯化和复性后,去除内毒素,利用酶联免疫吸附试验检测48例结核病患者、30例非结核肺部疾病患者及32例健康对照者全血中IFN-γ的释放量。结果CE21经SDS-PAGE分析后相对分子质量为45,与预期大小一致。CE21融合蛋白全血标本IFN-γ的检测,结核组阳性率为72.9%,非结核疾病对照组和健康对照组阳性率分别为3.3%和3.1%。结论成功获得CE21融合蛋白,IFN-γ的检测证明该融合抗原具有良好的结核病检测价值。更多还原…

关键词: 分枝杆菌,结核, 重组融合蛋白质类, 抗原,细菌, 干扰素Ⅱ型

Abstract: Objective To construct a recombinant plasmid of CFP10-ESAT-6-CFP21(CE21)fusion protein of Mycobacterium tuberculosis and evaluate the diagnosis value of CE21 fusion protein to tuberculosis based on IFN-γ detecting.Method The genes encoding CFP21 and CFP10-ESAT-6(CE)protein were amplified by PCR,cloned into vector pMD18-T respectively and then cloned into expression vector pET21a(+)twice.Recombinant pET21a-CFP10-ESAT-6-CFP21 plasmid was obtained and transformed into E.coli BL21(DE3).After express...

周舟, 丁元生, 刘忠华, 毛翎, 桂徐蔚, 胡忠义. 结核分枝杆菌CFP10-ESAT6-CFP21融合蛋白克隆表达及全血IFN-γ的检测[J]. 中国防痨杂志, 2010, 32(04): 211-216.

ZHOU Zhou, DING Yuan-Sheng, LIU Zhong-Hua, MAO Ling, GUI Xu-Wei, HU Zhong-Yi. [J]. Chinese Journal of Antituberculosis, 2010, 32(04): 211-216.

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