GeneXpert MTB/RIF检测技术相关研究
结核病(TB)是目前全球最严重的传染性疾病之一,利福平耐药实时荧光定量核酸扩增(Xpert MTB/RIF,简称“Xpert”)检测技术作为一种快速检测结核分枝杆菌(MTB)和利福平耐药性的方法,以较高的敏感度和特异度为TB的诊断和治疗提供了可靠的信息,但其本身还存在一些不足和局限。2017年3月,世界卫生组织(WHO)推荐新一代检测方法——超敏结核分枝杆菌和利福平耐药基因检测(Xpert MTB/RIF Ultra,简称“Xpert Ultra”)替代Xpert检测。与Xpert检测相比, Xpert Ultra检测对含菌量少的标本检测敏感度更高,如肺外结核、TB并发艾滋病、儿童结核病等,对于正确选择治疗药物、制定合理的治疗方案有重要的意义。作者对Xpert技术的局限性及其与Xpert Ultra的异同进行综述,为Xpert Ultra在临床中的应用提供依据。
目的 探讨GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert”)和线性探针技术检测骨关节结核及利福平耐药性的临床应用价值。方法 选取2018年3-12月接受病灶清除手术或穿刺术的疑似骨关节结核患者172例,同时采用GeneXpert、线性探针技术及BACTEC MGIT 960对患者病灶标本进行检测。以临床综合诊断为参照标准,评价GeneXpert、线性探针技术及两种方法联合检测骨关节结核的效能。以BACTEC MGIT 960药物敏感性试验(DST)结果为参照标准,评价GeneXpert、线性探针技术及两种方法联合检测MTB对利福平耐药性的效能。结果 172例疑似骨关节结核患者经临床综合诊断,112例诊断为骨关节结核,60例为非骨关节结核。以临床综合诊断为参照标准,GeneXpert检测骨关节结核的敏感度和特异度分别为82.14%(92/112)和96.67%(58/60),与临床诊断结果一致性良好(Kappa=0.74);线性探针技术检测的敏感度和特异度分别为69.64%(78/112)和90.00%(54/60),与临床诊断结果一致性一般(Kappa=0.54);两种方法联合检验的敏感度和特异度分别为82.14%(92/112)和90.00%(54/60),与临床诊断结果一致性良好(Kappa=0.68)。三种方法诊断骨关节结核的受试者工作特征曲线(简称“ROC曲线”)下面积分别为0.89、0.80、0.86,提示诊断价值均较好。以BACTEC MGIT 960 DST 结果为参照标准,GeneXpert检测MTB对利福平耐药性的敏感度和特异度分别为100.00%(18/18)和92.31%(24/26),与BACTEC MGIT 960 DST结果一致性较高(Kappa=0.91),ROC曲线下面积为0.96;线性探针技术检测MTB对利福平耐药性的敏感度和特异度分别为100.00%(18/18)和88.46%(23/26),与BACTEC MGIT 960 DST结果一致性较高(Kappa=0.86),ROC曲线下面积为0.94;两种方法联合检验结果与线性探针技术检测结果一致。结论 GeneXpert、线性探针技术能够快速、准确的检测骨关节结核及其耐药性,具有较好的临床应用价值。
目的 对GeneXpert MTB/RIF检测(简称“GeneXpert检测”)结核分枝杆菌(MTB)及其对利福平耐药性的临床应用进行综合评价,并探讨GeneXpert检测MTB对利福平耐药假阳性与临床标本低水平荷菌量的关系。方法 收集2016年4月至2017年9月在西安市胸科医院就诊的2707例疑似肺结核患者的临床标本,其中痰标本1945例,肺泡灌洗液标本762例,同时进行GeneXpert检测、BACTEC MGIT 960液体培养(简称“MGIT 960法”)及药物敏感性试验(简称“药敏试验”),并将GeneXpert检测MTB对利福平耐药的标本进行GenoType MTBDRplus检测(简称“MTBDRplus检测”)。结果 GeneXpert检测临床标本的阳性率为39.8%(1077/2707),对利福平是否耐药不确定者有7例,荷菌量水平均为“极低”。以MGIT 960药敏试验结果为标准,GeneXpert检测MTB对利福平耐药的敏感度和特异度分别为89.4%(135/151)和94.7%(721/761)。两种检测方法判断MTB对利福平耐药不一致的结果共56例,其中GeneXpert检测MTB对利福平耐药而MGIT 960药敏试验检测为敏感的40例患者中,处于“极低”、“低”、“中等”和“高”4个菌量水平的患者分别为10例、6例、14例和10例。以MGIT 960药敏试验检测结果为标准,4个菌量级别中,GeneXpert检测MTB对利福平耐药的假阳性率分别为58.8%(10/17)、16.7%(6/36)、19.2%(14/73)和20.4%(10/49),差异有统计学意义(χ 2=13.981,P<0.05)。对40例患者进行MTBDRplus检测,结果显示,标本荷菌量水平为“低”、“中等”和“高”的30例标本均为对利福平耐药,与GeneXpert检测结果完全一致。标本荷菌量水平为“极低”的10例标本中,有2例MTBDRplus检测阴性,8例阳性;检测阳性的8例中有5例对利福平敏感,3例对利福平耐药。结论 GeneXpert技术检测MTB是否对利福平耐药具有较高的敏感度和特异度,但在检测样本荷菌量极低时,可能会出现假耐药的情况。
目的 分析表型药物敏感性试验(简称“表型药敏试验”)与GeneXpert MTB/RIF在耐药脊柱结核诊断中发挥的作用。方法 回顾性分析2015—2018年首都医科大学附属北京胸科医院514例临床诊断为脊柱结核的患者资料,通过穿刺或外科手术获得病灶中的脓液、肉芽组织及干酪样坏死组织,并以无淀粉改良罗氏培养和浓度法进行结核分枝杆菌培养和表型药敏试验,同时进行GeneXpert MTB/RIF检测。结果 514例患者中,男260例(50.6%),女254例(49.4%);年龄1~86 岁,平均(46.2±18.7)岁;腰椎结核200例(38.9%),胸椎结核186例(36.2%),腰骶椎结核60例(11.7%), 胸腰段结核46例(8.9%),颈椎结核14例(2.7%),颈胸段结核8例(1.6%)。109例培养阳性并获得表型药敏试验结果,阳性率为21.2%;检出耐药患者25例(4.9%,25/514),其中耐多药结核病(MDR-TB)和广泛耐药结核病(XDR-TB)患者9例,占阳性患者的8.3%。GeneXpert MTB/RIF阳性383 例(74.5%),其中发现rpoB突变47 例(9.1%,47/514),包括表型药敏试验检出的9例MDR-TB和XDR-TB患者。 结论 脊柱结核病灶中耐药结核分枝杆菌通过表型药敏试验检出率偏低,不能及早发现耐药结核病患者,通过GeneXpert MTB/RIF方法可尽早发现更多耐药结核病患者。
为了解利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(GeneXpert MTB/RIF)在初诊肺结核患者诊断中的应用价值,作者收集了2015年1月至2016年12月浙江省嘉兴市第一医院就诊的初诊疑似肺结核患者361例,留取痰液标本分别进行涂片荧光金胺O染色镜检(简称“涂片镜检”)、结核分枝杆菌MGIT 320液体培养(简称“液体培养”)、GeneXpert MTB/RIF检测(简称“Xpert检测”)和固体比例法药物敏感性试验。最终临床诊断为:肺结核184例(50.97%),肺部感染162例(44.88%),非典型分枝杆菌肺部感染15例(4.15%)。361例疑似肺结核患者中,Xpert 检测的阳性率[32.41%(117/361)]明显高于涂片镜检[22.71%(82/361)](χ 2=8.49,P<0.05),与液体培养[26.32%(95/361)]比较不存在明显差异(χ 2=3.23,P=0.072),涂片镜检法与液体培养法比较差异无统计学意义(χ 2=1.26,P=0.261)。184例肺结核患者中,Xpert 检测的阳性率[63.59%(117/184)]高于涂片镜检[36.41%(67/184)]和液体培养[48.91%(90/184)](χ 2=27.17,P<0.01;χ 2=8.05,P<0.05);117例涂阴肺结核患者的Xpert检测阳性率[42.74%(50/117)]高于液体培养[24.79%(29/117)](χ 2=8.43,P=0.004)。以临床诊断为标准,Xpert检测初诊疑似肺结核患者的敏感度为63.59%(117/184),特异度为100.00%(177/177),正确指数为0.64。以固体比例法药物敏感性试验结果为金标准,Xpert 检测利福平耐药的敏感度为4/5,特异度为97.70%(85/87),正确指数为0.97。说明GeneXpert MTB/RIF在初诊疑似肺结核患者,尤其是涂阴肺结核患者中,检测结核分枝杆菌感染及对利福平耐药具有较高的效能。
目的 评价内科胸腔镜胸膜活检组织标本研磨悬液行结核分枝杆菌GeneXpert MTB/RIF(简称“Xpert”)检测对结核性胸膜炎的诊断价值。方法 选择2017年1月1日至12月31日在沈阳市胸科医院胸膜炎病房住院,行内科胸腔镜检查的不明原因胸腔积液患者51例,均未经过抗结核药物治疗。所有患者胸膜活检组织标本一部分行常规病理检查,另一部分研磨处理后制成悬液,行BACTEC MGIT 960分枝杆菌液体培养(简称“MGIT 960培养”)及Xpert 检测。以MGIT 960培养阳性并菌种鉴定为结核分枝杆菌和胸膜组织活检病理肉芽肿性病变并抗酸染色阳性作为确诊标准,评价活检组织研磨悬液行Xpert检测在结核性胸膜炎诊断中的价值。结果 51例患者中有34例确诊为结核性胸膜炎,其中通过MGIT 960培养阳性并菌种鉴定为结核分枝杆菌而确诊者20例(39.2%,20/51),通过胸膜组织活检病理阳性而确诊者17例(33.3%,17/51),其中3例患者被2种检测方法同时确诊;17例(33.3%)诊断为非结核性胸腔积液。以最终诊断结果为金标准,Xpert法、MGIT 960培养法、病理检查诊断的敏感度和特异度分别为64.7%(22/34)和100.0%(17/17)、58.8%(20/34)和100.0%(17/17)、50.0%(17/34)和100.0%(17/17);Xpert 法检测的敏感度高于MGIT 960培养法和病理诊断,但差异无统计学意义(χ 2=1.53,P=0.466)。结论 内科胸腔镜直视下取胸膜组织活检标本,通过研磨后使其液化,再行结核分枝杆菌Xpert检测,敏感度及特异度均较高,对结核性胸膜炎的确诊具有一定的临床意义。
目的 评价Xpert MTB/RIF 检测技术在综合性医院结核病诊断中的价值。方法 收集2016年6月至2017年8月入住株洲市中心医院疑似结核病患者的各类标本376份,其中痰标本227份(60.37%),肺泡灌洗液109份(28.99%),脑脊液21份(5.59%),胸腔积液15份(3.99%),其他标本4份(1.06%,包括引流液、脓液、分泌物、尿液各1份),分别进行GeneXpert MTB/RIF检测(简称“Xpert法”)、夹层杯液基集菌抗酸染色涂片镜检法(简称“夹层杯法”)和传统固体罗氏培养法(简称“固体培养法”)检测结果的比较和临床分析。采用SPSS 19.0软件进行数据资料处理,计数资料采用χ 2检验,以P<0.05为差异有统计学意义。 结果 376例疑似结核病患者的各类标本中,最终临床诊断为结核病349例,非结核病27例。Xpert法检测阳性率(37.50%,141/376)明显高于夹层杯法(22.87%,86/376)和固体培养法(17.82%,67/376)(χ 2值分别为19.09、36.39,P值均<0.05);以临床诊断结果为标准,Xpert法检测敏感度(40.11%,140/349)明显高于夹层杯法(23.50%,82/349)和固体培养法敏感度(19.20%,67/349)(χ 2值分别为19.86、35.98,P值均<0.05),且Xpert法检测结果与临床确诊结果的一致性(K=0.080)高于夹层杯法(K=0.016)与固体培养法(K=0.033)。140份Xpert法检测阳性的标本中利福平耐药率(15.71%,22/140)与63份固体培养法检测阳性的标本中利福平耐药率(14.29%,9/63)差异无统计学意义(χ 2=0.07,P>0.05),且耐利福平患者一致。 结论 Xpert法检测技术操作简单、快捷、敏感度高,对综合性医院早期诊断、治疗结核病具有很高的临床应用价值。
目的 评价GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert”)检测技术对结核性胸膜炎诊断的应用价值。方法 选取2017年1—12月辽宁省鞍山市结核病医院内科病房初诊疑似结核性胸膜炎患者180例。所有患者均在超声引导下行胸腔穿刺留取胸腔积液并立即送检,胸腔积液分别行抗酸染色涂片法检查(简称“涂片法”)、BACTEC MGIT 960液体培养法(简称“MGIT 960培养”)和 GeneXpert检测。以临床确定诊断为参考标准,评价涂片法、MGIT 960培养和GeneXpert检测胸腔积液标本中结核分枝杆菌(MTB)的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和一致率。结果 在180例疑似结核性胸膜炎患者中,162例(90.00%)患者临床确诊为结核性胸膜炎,18例(10.00%)患者最终排除结核性胸膜炎。162例临床确诊患者中,61例(37.65%) MGIT 960培养阳性;101例(62.35%)根据临床表现、胸腔积液的生化指标、胸部影像和抗结核治疗有效等临床诊断为结核性胸膜炎。18例非结核性胸膜炎患者包括肺癌胸膜转移9例,结节病1例,系统性红斑狼疮性胸膜炎1例,胸膜间皮瘤2例,肾病综合征2例,心功能不全2例和低蛋白血症1例。以临床确诊结果为参考标准,涂片法、MGIT 960培养和GeneXpert检测的敏感度分别为0.00%(0/162)、37.65%(61/162)、54.94%(89/162);特异度均为100.00%(0/18);阳性预测值分别为0.00%(0/0)、100.00%(61/61)、100.00%(89/89);阴性预测值分别为10.00%(18/180)、15.13%(18/119)、19.78%(18/91);一致率分别为10.00%(18/180)、43.89%(79/180)、59.44%(107/180)。GeneXpert检测的敏感度明显高于涂片法和MGIT 960培养,差异有统计学意义(χ 2=119.82,P=0.000)。 结论 GeneXpert检测技术在结核性胸膜炎的诊断中具有较高的临床应用价值。
为评价GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert”)检测细针穿刺活检组织洗脱液对肺外结核的辅助诊断价值,笔者分别采用荧光定量PCR(TB-DNA PCR)、GeneXpert、固体培养法及涂片法检测武汉市肺科医院2016年1月至2017年12月期间确诊的103例肺外结核患者病变部位细针穿刺活检组织洗脱液。结果显示,GeneXpert检测敏感度[78.6%(81/103)]明显高于固体培养法[26.2%(27/103)]和涂片法[16.5%(17/103)],差异均有统计学意义(χ 2值分别为56.76和79.72,P值均<0.05)。可见,GeneXpert检测细针穿刺活检组织洗脱液对肺外结核的诊断敏感度较高。
耐药结核病尤其是耐多药结核病(MDR-TB)和广泛耐药结核病(XDR-TB)是目前临床亟待解决的难题之一,而对抗结核药物进行药物敏感性试验(DST)可为耐药结核病的诊断提供实验室依据。本专家共识简要地介绍了我国临床常用的结核分枝杆菌(MTB)DST方法(包括表型DST和分子DST);提出了MTB耐药性检测策略和正确判读检测结果的建议;指出目前DST检测技术和临床应用存在的问题,并对未来DST的发展前景进行了展望。
目的 探讨微孔板法和GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert”)技术检测MTB对利福平(RFP)耐药性的价值。方法 收集陕西省结核病防治院2017年收住入院和门诊诊治的疑似结核病患者6893例,按照临床诊断标准确诊为结核病患者6086例,同时使用BACTEC MGIT 960液体培养(简称“MGIT 960法”)和GeneXpert技术检测上述确诊患者的425份临床标本;其中,痰标本217份、肺泡灌洗液标本170份、肺外标本(包括胸腹腔积液、脓液,脑脊液等)38份;排除3例报告错误或无法判读、2例培养结果污染的标本,有效标本份数为420份。对其中GeneXpert技术和MGIT 960液体培养均为阳性的372株临床分离株同时进行微孔板法、GeneXpert技术和MGIT 960耐药性检测,其中痰标本191例、肺泡灌洗液标本158例、肺外标本(包括胸腹腔积液、脓液及脑脊液等)23例,以MGIT 960检测结果为标准,分析微孔板法和GeneXpert技术检测结核分枝杆菌对RFP耐药性的诊断价值。结果 GeneXpert技术、微孔板法和MGIT 960法对RFP耐药性检测总的阳性率分别为18.8%(70/372)、16.7%(62/372)、16.7%(62/372)。以MGIT 960法检测结果为标准,微孔板法和GeneXpert法对利福平耐药性检测的敏感度、特异度、符合率、Kappa值分别为91.9%(57/62)、98.4%(305/310)、97.3%(362/372)、0.8,96.8%(60/62)、96.8%(300/310)、96.8%(360/372)、0.8;微孔板法和GeneXpert法对痰液、肺泡灌洗液、肺外标本利福平耐药性检测的敏感度、特异度、符合率、Kappa值分别为96.7%(29/30)、98.1%(158/161)、97.9%(187/191)、0.9,93.3%(28/30)、96.3%(155/161)、95.8%(183/191)、0.9, 91.7%(22/24)、98.5%(132/134)、97.5%(154/158)、0.9和100.0%(24/24)、97.0%(130/134)、97.5%(154/158)、0.9,75.0%(6/8)、100.0%(15/15)、91.3%(21/23)、0.8,100.0%(8/8)、100.0%(15/15)、100.0%(23/23)、1.0。结论 以MGIT 960检测结果为标准,微孔板法和GeneXpert技术对利福平耐药性检测总的阳性率和不同标本对利福平耐药性检测的阳性率均具有较好的一致性。
1934年创刊 月刊 ISSN 1000-6621 CN 11-2761/R
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